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考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理是什么
在酸性条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，导致da吸收峰由465 nm 变为595 nm，同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合，测量在595 nm处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA建立的标准曲线的情况下，蛋白质的浓度可以根据标准曲线而确定。
考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色，da光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有da光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。
该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/mL，xaio可测2.5μg/mL蛋白质，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。
亮蓝易溶于水，呈绿光蓝色溶液，溶于乙醇、甘油、丙二醇。耐光、耐热性强。对柠檬酸、酒石酸、碱均稳定。
1.用途：一种偶氮型酸性染料。主要用于食品、饮料着色，也用于羊毛、蚕丝的染色及制造色淀。水溶性合成色素，鲜艳的嫩黄色，广泛用于冰淇淋、雪糕、果冻、酸奶、饮料、罐头、糖果包衣等的着色。
根据中国《食品添加剂使用卫生标准》（GB2760-1996）规定：用于高糖果汁（味）或果汁（味）或果汁（味）饮料、碳酸饮料、配制酒、糖果、糕点上彩装、西瓜酱罐头、青梅、虾（味）片、渍制小菜、红绿丝，使用量0.1g/kg；用于冰淇淋，使用量0.02g/kg。用于植物蛋白饮料、乳酸菌饮料，用量0.05g/kg。
中文名：亮蓝
英文名：Brilliant Blue
化学式：C47H48N3NaO7S2
CAS号：6104-58-1、3844-45-9
摩尔质量：854.02
外观：带金属光泽的深紫至青铜色颗粒或粉末
熔点：100°C℃
闪点：11℃ 分子式:C37H34N2Na2O9S3分子量:792.85保质期为5年
《食品添加剂使用卫生标准》（GB2760-1996）中规定：亮蓝可用于果味型饮料（液、固体）、果汁型饮料、汽水、配制酒、糖果、糕点上彩装、红绿丝、罐头、浓缩果汁、青梅、对虾片，使用量为0.025g/kg；冰淇淋，使用量为0.021999g/kg。红绿丝的使用量可加倍；果味粉着色剂加入量按稀释倍数的50%加入
以上信息由专业从事工业级亮蓝生产厂家的富舜新材料于2025/5/9 15:54:29发布
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